Papel del extremo NH2 terminal en la vasoactividad del receptor de bradicinina B2 en carótida

Abstract

Introducción: BKRB2 es un GPCR presente en vasos sanguíneos que es capaz de activarse en respuesta a fuerzas mecánicas conocidas como shear stress. La interacción de BK con BKRB2 provoca una respuesta dependiente de flujo posiblemente debido a un cambio conformacional en la región NH2 extracelular que detecta el cambio en la magnitud de shear stress. Al ser una de las regiones expuestas al flujo, se propone que el aumento de flujo moviliza esta región y aumenta la capacidad de unión de BK a BKRB2 y generar una mayor respuesta. Metodología: Se realizaron estudios in silico entre BKRB2 sin la región NH2 extracelular y BK. De igual manera, se hicieron estudios in vitro en células endoteliales para analizar la modificación estructural de BKRB2 con acción proteolítica de α-quimiotripsina y posteriormente niveles de p-ERK1/2. Finalmente, se efectuaron ensayos de tensión isométrica para evaluar la EC50. Resultados: La ausencia del extremo NH2 aumenta la energía de interacción, RMSF y puentes de hidrógeno entre BKRB2 y BK en los estudios in silico. El tratamiento con α-quimiotripsina en la carótida provocó una mayor afinidad por BK, expresada en una EC50 menor que la del control. In vitro, α-quimiotripsina provoca un efecto variable en la activación de la vía MAPK en presencia de BK y una disminución mínima en el peso molecular de BKRB2. Discusión: El aumento de los puentes de H2, y de la energía de interacción soportan la idea de una mayor estabilidad en el complejo al no impedir su interacción por el extremo NH2, la movilidad en ECL2 y ECL3 se relaciona con el reconocimiento de BK. No obstante, las inespecificidades de α-quimotripsina pudieron resultar de no utilizar el pH ideal de acción, lo que pudo entorpecer su actividad, por lo cual es una limitante de este trabajo. Conclusión: Este estudio consideró 3 enfoques diferentes con el propósito de sugerir resultados robustos. Dentro de las prospectivas se encuentra evaluar vías de señalización diferentes, ensayos de afinidad y uso de BKRB2 truncado sin la región NH2 terminal.