Abstract:
En este estudio se estableció la aclimatación simbiótica de plantas de Encyclia parviflora y Stanhopea tigrina propagadas in vitro. Para ambas especies se establecieron dos fases previas a la aclimatación: la inducción de rizogénesis in vitro y una etapa de preaclimatación in vitro. Posterior a ello, se aislaron los hongos endófitos de las dos especies de orquídeas y algunas cepas fueron caracterizadas con técnicas moleculares. Se analizaron doce cepas de hongos endófitos aislados de las orquídeas para comprobar su capacidad en la promoción del crecimiento en una planta modelo y finalmente los dos hongos que mostraron los mejores resultados en esta etapa fueron estudiados para analizar su efecto en la etapa de aclimatación. Para E. parviflora, el medio de cultivo más óptimo para la inducción de rizogénesis fue el enriquecido con 2.5 mg L-1 de la auxina ácido indol butírico (AIB) + 100 ml L-1 de agua de coco, en tanto que, para S. tigrina, la adición de 5.0 mg L-1 de la auxina ácido indol acético (AIA) + 100 ml L-1 de agua de coco fue el medio de cultivo más eficiente. Para la etapa de la preaclimatación in vitro, los resultados mostraron que el mejor sustrato de soporte para ambas especies fue el constituido por corteza de pino, turba de Sphagnum y roca tepezil (2:3:1), con el cual se obtuvo el mejor porcentaje de sobrevivencia, el mejor desarrollo foliar y la mayor altura de las plantas. Respecto a los hongos aislados para las raíces de E. parviflora y S. tigrina, el género fúngico más abundante fue Trichoderma sp., en tanto que, para hojas y pseudobulbos, los géneros más abundantes pertenecieron a Penicillium sp. Colletotrichum sp., Lasiodiplodia sp. y Fusarium sp. Los análisis moleculares para tres cepas fúngicas confirmaron la identidad de Lasiodiplodia theobromae, Trichoderma hamatum y una especie para la cual no se logró su identificación de acuerdo con la base de datos de la NCBI, por lo cual se sugiere como una “Probable Nueva Especie (PNE)”. Las vitroplantas inoculadas con T. hamatum y la PNE lograron un alto porcentaje de sobrevivencia, además de que indujeron la promoción del crecimiento en hojas y raíces en ambas especies de orquídeas durante la etapa de aclimatación simbiótica.
Description:
In this study, symbiotic acclimation of Encyclia parviflora and Stanhopea tigrina plants propagated by in vitro ways was established. For both species, two phases prior to acclimatization were established: in vitro induction of rhizogenesis and an in vitro preacclimatization stage. After that, the endophytic fungi of the two orchid species were isolated and some strains were characterized with molecular techniques. Twelve strains of endophytic fungi isolated from the orchids were analyzed to verify their ability to promote growth in a model plant and finally the two fungi that showed the best results in this stage were studied to analyze their effect in the acclimatization stage. For E. parviflora, the most optimal culture medium for the induction of rhizogenesis was that enriched with 2.5 mg L-1 of the auxin indole butyric acid (IBA) + 100 ml L-1 of coconut water, while, for S. tigrina, the addition of 5.0 mg L-1 of the auxin indole acetic acid (AIA) + 100 ml L-1 of coconut water was the most efficient culture medium. For the in vitro preacclimatization stage, the results were that the best support substrate for both species was constituted by pine bark, Sphagnum and tepezil rock (2:3:1), with which the best was obtained percentage of survival, the best leaf development and the highest height of the plants. For the fungi isolated from the roots of E. parviflora and S. tigrina, the most abundant fungal genus was Trichoderma sp., Whereas, for leaves and pseudobulbs, the most abundant genera belonged to Penicillium sp. Colletotrichum sp., Lasiodiplodia sp. and Fusarium sp. Molecular analyzes for three fungal strains confirmed the identity of Lasiodiplodia theobromae, Trichoderma hamatum and one species for which identification was not achieved according to the NCBI database, which is why it is suggested as a "Probable New Species (PNE)". Vitroplants inoculated with T. hamatum and the PNE achieved a high percentage of survival, in addition to inducing the growth promotion in leaves and roots in both species of orchids during the symbiotic acclimatization stage.