Caracterización química de extractos orgánicos de Calea urticifolia (Mill.) DC. Y bioensayo dirigido para determinar su actividad antiinflamatoria in vitro

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto antiinflamatorio in vitro de las fracciones orgánicas de extractos de Calea uriticifolia (Mill.) DC. a través de la cuantificación de TNF-α y determinar la fracción bioactiva para su caracterización química. Se realizó la evaluación de la actividad biológica en cultivo de células mononucleares humanas (CMN) de 9 fracciones obtenidas a partir del extracto etanólico, 4 extractos de diferente polaridad (hexano, diclorometano, etanol y agua) obtenidos por percolación, 11 fracciones del extracto diclorometano y 12 del extracto hexánico. Se tomaron CMN de cinco individuos sanos, las cuales fueron cultivadas con los diferentes tratamientos. Experimento 1 y 2: 88, 8.8, 0.88 y 0.088 μg/mL, experimento 3 y 4: 88 y 8.8 μg/mL de cada una de las fracciones/extractos diluidos en DMSO 1%; control de células sin estímulo, control de LPS 1 μg/mL, control de indometacina 5 μg/mL, control DMSO 1%. Tras 24 hrs de incubación, se obtuvo el sobrenadante que fue analizado para determinar la concentración de TNF-α mediante la técnica de ELISA. Con los datos obtenidos se hizo un análisis de varianza y un posterior análisis de comparación de medias de Tukey. Se determinaron los compuestos químicos presentes en las fracciones más activas mediante CG/EM tras un proceso de derivatización. Se realizó la identificación de lactonas sesquiterpénicas por cromatografía en capa fina en las fracciones activas, así como la purificación y determinación de Rf de los productos puros más abundantes, los cuales fueron sometidos a un análisis por espectroscopía infrarrojo. Los resultados obtenidos mostraron que las 9 fracciones obtenidas a partir del extracto etanólico presentaron efecto inhibitorio de TNF-α dosis dependiente (p<0.05). De los extractos obtenidos por percolación, tres presentaron efecto inhibitorio de TNF-α en comparación con el grupo estimulado con LPS, sin ser diferentes entre ellos (p<0.05). Las fracciones 8 y 9 del extracto diclorometano y 9 y 10 del hexánico presentaron efecto inhibitorio de TNF-α comparado con el grupo estimulado con LPS. Siendo este efecto antiinflamatorio igual al del grupo tratado con el fármaco prototipo antiinflamatorio (indometacina) para las fracciones 8 y 9 de diclorometano; en cambio las fracciones 9 y 10 presentaron un mayor efecto antiinflamatorio que el observado con indometacina (p<0.05). En las fracciones activas fueron identificados los siguientes compuestos: acetato de fitol, transfitol, fitol, ácido palmítico, ácido málico, ácido linoleico, ácido linolénico, oftalato de isooctilo, oftalato de 2-didecanilo, ácido oftálico; de estos, los ácidos: palmítico, linoleico y linolénico, así como el fitol han sido reportados en la literatura como compuestos que presentan actividad antiinflamatoria. Manchas negras, verdes y rojas observadas en la cromatografía en capa fina correspondieron a lactonas sesquiterpénicas. Fueron obtenidos 9 compuestos (C) puros, siendo mayoritarios 2 de ellos (C3 y C5) con un Rf de 0.5366 y 0.6098 respectivamente. El espectro infrarrojo de cada uno de estos dos compuestos mostró similitudes entre sí, se observaron bandas que indican presencia de vibraciones de tensión de O-H, C=O, C-O y Csp3-H, lo que nos indica que se puede tratar de isómeros del mismo compuesto además de que estas bandas son características de fragmentos moleculares de tipo carbohidrato. La inhibición de TNF-α in vitro de los diferentes extractos y fracciones de Calea urticifolia (Mill.) DC está sujeta a la polaridad del extracto con la que se obtenga, así como a la fracción orgánica estudiada y a su composición química.