Resumen:
El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto antiinflamatorio in vitro de las fracciones orgánicas de extractos de Calea uriticifolia (Mill.) DC. a través de la cuantificación de TNF-α y determinar la fracción bioactiva para su caracterización química.
Se realizó la evaluación de la actividad biológica en cultivo de células mononucleares humanas (CMN) de 9 fracciones obtenidas a partir del extracto etanólico, 4 extractos de diferente polaridad (hexano, diclorometano, etanol y agua) obtenidos por percolación, 11 fracciones del extracto diclorometano y 12 del extracto hexánico. Se tomaron CMN de cinco individuos sanos, las cuales fueron cultivadas con los diferentes tratamientos. Experimento 1 y 2: 88, 8.8, 0.88 y 0.088 μg/mL, experimento 3 y 4: 88 y 8.8 μg/mL de cada una de las fracciones/extractos diluidos en DMSO 1%; control de células sin estímulo, control de LPS 1 μg/mL, control de indometacina 5 μg/mL, control DMSO 1%. Tras 24 hrs de incubación, se obtuvo el sobrenadante que fue analizado para determinar la concentración de TNF-α mediante la técnica de ELISA. Con los datos obtenidos se hizo un análisis de varianza y un posterior análisis de comparación de medias de Tukey.
Se determinaron los compuestos químicos presentes en las fracciones más activas mediante CG/EM tras un proceso de derivatización. Se realizó la identificación de lactonas sesquiterpénicas por cromatografía en capa fina en las fracciones activas, así como la purificación y determinación de Rf de los productos puros más abundantes, los cuales fueron sometidos a un análisis por espectroscopía infrarrojo.
Los resultados obtenidos mostraron que las 9 fracciones obtenidas a partir del extracto etanólico presentaron efecto inhibitorio de TNF-α dosis dependiente (p<0.05). De los extractos obtenidos por percolación, tres presentaron efecto inhibitorio de TNF-α en comparación con el grupo estimulado con LPS, sin ser diferentes entre ellos (p<0.05). Las fracciones 8 y 9 del extracto diclorometano y 9 y 10 del hexánico presentaron efecto inhibitorio de TNF-α comparado con el grupo estimulado con LPS. Siendo este efecto antiinflamatorio igual al del grupo tratado con el fármaco prototipo antiinflamatorio (indometacina) para las fracciones 8 y 9 de diclorometano; en cambio las fracciones 9 y 10 presentaron un mayor efecto antiinflamatorio que el observado con indometacina (p<0.05). En las fracciones activas fueron identificados los siguientes compuestos: acetato de fitol, transfitol, fitol, ácido palmítico, ácido málico, ácido linoleico, ácido linolénico, oftalato de isooctilo, oftalato de 2-didecanilo, ácido oftálico; de estos, los ácidos: palmítico, linoleico y linolénico, así como el fitol han sido reportados en la literatura como compuestos que presentan actividad antiinflamatoria. Manchas negras, verdes y rojas observadas en la cromatografía en capa fina correspondieron a lactonas sesquiterpénicas. Fueron obtenidos 9 compuestos (C) puros, siendo mayoritarios 2 de ellos (C3 y C5) con un Rf de 0.5366 y 0.6098 respectivamente. El espectro infrarrojo de cada uno de estos dos compuestos mostró similitudes entre sí, se observaron bandas que indican presencia de vibraciones de tensión de O-H, C=O, C-O y Csp3-H, lo que nos indica que se puede tratar de isómeros del mismo compuesto además de que estas bandas son características de fragmentos moleculares de tipo carbohidrato.
La inhibición de TNF-α in vitro de los diferentes extractos y fracciones de Calea urticifolia (Mill.) DC está sujeta a la polaridad del extracto con la que se obtenga, así como a la fracción orgánica estudiada y a su composición química.
